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12種真菌毒素檢測,Thermo色譜一針盡在掌握
更新時間:2019-07-04   點擊次數(shù):2750次


真菌毒素是真菌在適宜條件下產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物,能夠引發(fā)人類、動物各種急、慢性疾病。我國高度重視真菌毒素污染問題,GB 2761-2017 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素* 規(guī)定了食品中黃曲meidu素B1、黃曲meidu素M1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的*。據(jù)報道我國每年有3100萬噸糧食在生產(chǎn)、儲存、運輸過程中被真菌污染,約占糧食年總產(chǎn)量的6.2%。為了保證我國糧食質(zhì)量安全,避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失,及時快速監(jiān)測真菌毒素污染種類、水平及其風(fēng)險尤為重要。

 

由于真菌毒素種類多樣,且存在協(xié)同污染,為確保全面、快速的了解糧食中真菌毒素的污染情況,迫切需要一種簡單、快速、靈敏、同時準(zhǔn)確測定糧食中多種真菌毒素的方法。目前真菌毒素的前處理檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、免疫親和柱方法等。

基于抗原抗體相互作用的酶聯(lián)免疫吸附法雖有較高的選擇性,但無法準(zhǔn)確定量,同時由于前處理簡單,沒有有效的凈化,易受基質(zhì)干擾,產(chǎn)生假陽性。免疫親和柱前處理凈化方法由于其特異性吸附,凈化效果好,但是一方面操作復(fù)雜,另外一方面成本較高,不適合大規(guī)模檢測。

 

給大家分享使用QuEChERS作為前處理凈化的方法,操作簡單,重復(fù)性好,回收率高。采用Accucore aQ HPLC 色譜柱分離,表面多孔增強(qiáng)核技術(shù)的運用,兼容100%水相,同時增強(qiáng)了對極性化合物的保留及選擇性。采用LC-MS/MS方法,15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析,該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析檢測。

樣品前處理

1

樣品提取

1

稱取5g均質(zhì)后的樣品放入50mL離心管中,加入10 mL 水,震搖15 min

2

再加入10mL 2%甲酸乙腈,旋渦混合1min

3

加入HyperSep萃取鹽包(P/N 60105-332-B:4g MgSO?,1g NaCl) ,快速震搖1min.

4

≥3000g 離心5min

 

2

樣品凈化

1

移取1mL上清液到HyperSep凈化管中(P/N:60105-204-B:QuEChERS  2mL 離心管 帶150mg MgSO?, 50mg PSA 50mg C18 ),震搖30s, ≥3000g 離心5min

2

移取500μL凈化液,使用純水稀釋4倍,過0.2μm濾膜后上機(jī)檢測

 

色譜條件

色譜柱

Accucore aQ, 100 × 2.1 mm, 2.6 μm(P/N 17326-102130)

柱溫

35 ℃

進(jìn)樣量

10 µL

流動相

A0.1%甲酸水B0.1% 甲酸乙腈

 

表1.梯度洗脫程序(點擊查看大圖)

 

質(zhì)譜條件

離子源

電噴霧離子源

質(zhì)譜掃描方式

多重反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)

錐孔電壓

3.0kV

加熱氣溫度

500℃

離子源溫度

150℃

脫溶劑氣

800L/H

選擇反應(yīng)監(jiān)測離子對信息見下表

 

表2.化合物及質(zhì)譜采集參數(shù)(點擊查看大圖)

 

實驗結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)品及樣品加標(biāo)譜圖

 

圖1.12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜(濃度見表3)(點擊查看大圖)

 

圖2.玉米中12種真菌毒素加標(biāo)圖譜(加標(biāo)濃度見表3)(點擊查看大圖)

采用上述分析方法,12 種真菌毒素在15 min內(nèi)均可獲得良好的色譜峰,圖1為 12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜(濃度見表3),各化合物靈敏度測試結(jié)果見表3,LOD在0.1-2ug/kg之間。12 種真菌毒素相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD% 均小于15%(見表3)

 

表3.12種真菌毒素回收率數(shù)據(jù)及LOD(點擊查看大圖)

 

 

結(jié)論

開發(fā)了一種快速簡單的QuEChERS前處理方法用于糧谷中12種典型真菌毒素的分析,使用Accucure aQ表面多孔增強(qiáng)核色譜柱,增強(qiáng)了對極性化合物的保留及選擇性,峰形良好。采用LC-MS/MS方法,15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析,并獲得較好的回收率,回收率范圍60-110%,LOD為0.1-2 ug/kg,該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析。

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