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液相分析常見問題⑥ 峰面積變來變?nèi)o法定量
更新時間:2019-07-22   點擊次數(shù):6599次


峰面積是定量分析的基礎,峰面積的變化會導致精密度、標曲、定量分析等一系列問題。

 

那么,如果遇到峰面積不穩(wěn)定的情況,我們要怎么辦?讓我們分三種情況分別來看一看:

 

一、峰面積變小

 

1. 儀器漏液

儀器漏液會導致樣品損失,與正常測定結果相比,會出現(xiàn)色譜峰減小的情況。

→這種時候,需要檢查系統(tǒng)壓力,確保所有螺絲或連接處無漏液情況,排查儀器方面的原因。

 

2. 樣品穩(wěn)定性不好

有些樣品自身穩(wěn)定性不好,配置后,隨著進樣時間的推移會出現(xiàn)降解現(xiàn)象。

→如果連續(xù)進樣過程中,主峰的峰面積減小,同時伴隨雜質(zhì)峰面積增加的情況,建議確認樣品在溶劑或流動相中的穩(wěn)定性情況。

 

3. 進樣瓶中樣品量過少

當樣品瓶中樣品過少可能導致進樣針未吸取到足夠樣品進樣。

添加樣品或使用內(nèi)襯管即可解決。

 

4. 針峰面積減小

進樣瓶的瓶蓋擰緊后,瓶內(nèi)會出現(xiàn)負壓,可能導致進樣器取樣不準確。

→第二次進樣時,由于瓶蓋已經(jīng)有孔,負壓消除后進樣峰面積會恢復正常;也可通過使用預開口進樣小瓶來解決該類問題。

 

二、峰面積變大

 

可能是由于色譜柱或流動相條件導致樣品吸附,特別是一些帶電荷情況較為復雜的蛋白或多肽類樣品。

→大濃度進樣、平衡可能的吸附位點

更換色譜柱優(yōu)化方法

(推薦更換MG、MGII、或Proteonavi進行嘗試)

 

▲CAPCELL PAK 聚合物包被結構示意圖

 

Proteonavi

 

Proteonavi是采用在多孔球形硅膠填料表面鍵合丁基(C4的高性能蛋白質(zhì)•多肽分析色譜柱。該填料既具有硅膠類填料的高分離能力耐壓性,又具有耐酸性抑制蛋白質(zhì)吸附等特長。

 

★ 具備*的耐酸性

★ 填料表面的蛋白吸附,即使樣品量少也能被檢出

★ 可對應從分析到制備的規(guī)模擴大化

 

三、峰面積忽大忽小,變化無規(guī)律

 

1. 自動進樣器故障或混入氣泡

→進樣過程中,觀察進樣針中無氣泡混入,如果自動進樣器出現(xiàn)故障,需要咨詢相應品牌儀器工程師。

 

2. 樣品過于黏稠會導致進樣不準確

稀釋樣品通??梢越鉀Q

 

3. 進樣瓶中混入氣泡

→部分樣品容易混入氣泡,比如一些表面活性劑類樣品,觀察進樣瓶中是否有小氣泡,或者對進樣瓶進行超聲脫氣。

 

PS: 以上對策主要針對液相分析檢測中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn)的情況,如果在質(zhì)譜分析中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn),則可能會有離子化、基質(zhì)效應等其他原因。

 

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